SABC試劑盒
使用說(shuō)明書(shū)
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!
第1版（2016年04月修訂）
關(guān)聯(lián)信息
SABC（Strept Avidin Biotin-peroxidase Complex Method）即鏈霉親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物技術(shù)，是一種顯示組織和細(xì)胞中抗原分布的免疫組化染色方法。鏈霉親和素（Strept avidin）是一種從鏈霉菌屬細(xì)菌 Streptomyces avidinii中純化獲得的四聚體蛋白。生物素為含硫的雜環(huán)單羧酸，通過(guò)其羧基與蛋白質(zhì)的氨基結(jié)合，從而可標(biāo)記抗體。一分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結(jié)合，兩者之間的親和力極為強(qiáng)烈。同時(shí)，由于鏈霉親和素等電點(diǎn)低，對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，具有低的免疫組化背景。SABC大約可形成上百個(gè)左右的過(guò)氧化物酶和數(shù)十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物,從而有很強(qiáng)的放大作用。SABC法具有高敏感性，低背景和操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。本試劑盒適用于免疫組織化學(xué)方法以顯示待測(cè)抗原的分布，適用于常規(guī)石蠟包埋切片、冰凍切片，培養(yǎng)固定的細(xì)胞切片以及新鮮制備的血涂片、爬片等。
制品內(nèi)容
| 名稱(chēng) | 規(guī)格 | 成份及用途 |
| 正常豚鼠血清封閉液 | 10mL | 用于組織切片的封閉 |
| 二抗 | 0.2mL(50×) | 生物素標(biāo)記的豚鼠抗兔IgG |
| SABC | 0.2mL(50×) | 鏈酶親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物 |
儲(chǔ)存及有效期
所有試劑4℃保存,有效期1年。
自備試劑
1、粘片劑 APES或Poly-L-Lysine。
2、0.02M PBS（pH7.2-pH7.6)：Na2HPO4·12H2O 7g， NaH2PO4·2H2O 0.5g，NaCl 9g，溶于1L蒸餾水中。
3、0.01M枸櫞酸鹽緩沖液：枸櫞酸三鈉(C6H5Na3O7·2H2O) 3g，枸櫞酸(C6H8O7·H2O) 0.4g，溶于1L蒸餾水中。
4、DAB顯色試劑盒。
石蠟切片免疫組化染色操作步驟
1、載玻片的處理：可選擇APES或Poly-L-Lysine對(duì)已清洗的載玻片進(jìn)行處理，室溫干燥或60℃烤箱烘烤一小時(shí)；
2、石蠟切片，脫蠟至水；
3、用蒸餾水或PBS配置新鮮的3% H2O2室溫孵育5-10分鐘，以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性；
4、蒸餾水洗3次；
5、抗原修復(fù)：根據(jù)待檢測(cè)的抗原，選擇適當(dāng)?shù)姆椒ǎ?br/>
石蠟切片電爐煮沸抗原修復(fù)操作方法：將切片浸入0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0），電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10分鐘后，反復(fù)1-2次。冷卻后PBS（pH 7.2-7.6）洗滌1-2 次。
石蠟切片高壓抗原修復(fù)操作方法：將切片浸入0.01M 枸櫞酸鈉緩沖液（pH 6.0），淹沒(méi)切片，蓋上鍋蓋，當(dāng)壓力鍋開(kāi)始慢慢噴氣時(shí)（約加熱5-6分鐘后），計(jì)時(shí)21-分鐘，然后將壓力鍋端離熱源，冷水沖至室溫后，取下氣閥，打開(kāi)鍋蓋，取出切片，蒸餾水洗后，PBS（pH 7.2-7.6）洗滌3次。
酶消化處理：用0.1%的胰蛋白酶作消化液，消化時(shí)間為 37℃，10-40分鐘，主要用于細(xì)胞內(nèi)抗原的顯示。也可用0.4%的胃蛋白酶，消化時(shí)間為37℃，30-180分鐘，主要用于細(xì)胞間質(zhì)抗原的顯示。
6、滴加正常豚鼠血清封閉液，室溫20分鐘。傾去血清，勿洗；
7、滴加適當(dāng)稀釋的一抗（兔IgG），37℃ 1小時(shí)左右或 20℃ 時(shí)2小時(shí)左右，也可4℃過(guò)夜；
8、PBS（pH 7.2-7.6）洗2分鐘，3次；
9、加生物素化抗兔 IgG，20-37℃ 20分鐘。PBS（pH 7.2-7.6）洗2分鐘×3次；
10、滴加試劑 SABC，20-37℃ 20分鐘。PBS（pH 7.2-7.6）洗5分鐘×4次；
11、DAB 顯色：使用 DAB 顯色試劑盒。取顯色液 A，B，按說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行混勻，根據(jù)標(biāo)本大小，取適當(dāng)體積加至切片。室溫顯色，顯微鏡下觀察顯色反應(yīng)，時(shí)間一般在5-10分鐘之間。達(dá)到合適著色強(qiáng)度時(shí)（陽(yáng)性較強(qiáng)，背景較低），即可用蒸餾水洗滌切片,終止反應(yīng)；
12、蘇木素輕度復(fù)染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。
注意事項(xiàng)
1、一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō)，陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間；背景過(guò)高時(shí)，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。如在SABC反應(yīng)之后，DAB 顯色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBS（pH 7.2-7.6）洗滌切片4次，單純PBS 洗2次，然后DAB顯色。
2、熱修復(fù)抗原可選0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（PH 6.0）；也可以使用PBS、TBS等多種緩沖液。
3、脫蠟不徹底，容易出現(xiàn)非特異性背景染色，建議免疫組化切片脫蠟與常規(guī)H.E脫蠟分開(kāi)。
4、如果將本試劑盒用于肝臟與腎臟等含內(nèi)源性生物素含量豐富的組織切片，需要進(jìn)行封閉的特殊處理。
5、不得使用過(guò)期的試劑盒，不同批號(hào)間的試劑盒也不能交叉混用。
警告：DAB為可疑致癌物，請(qǐng)采取必要的防范措施。
