免疫組化輔助試劑包（抗兔/小鼠igg）

使用說明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

第1版（2016年04月修訂）

[產(chǎn)品信息]

通過辣根過氧化物酶（HRP）標記抗兔/小鼠抗體與結合在組織片上的一抗（來源于兔或小鼠）特異性結合形成免疫復合物。位于聚合物上HRP會催化底物H2O2與DAB反應，最終形成棕褐色不溶性色原，特異性的將免疫原在組織和細胞中標定出來，通過顯微鏡觀察確定免疫原的最終位點。

[試劑組分]

編號	成分	包裝規(guī)格
1	內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑工作液	3mL	6mL	18mL	55mL	110mL
2	HRP標記抗兔/小鼠IgG聚合物	3mL	6mL	18mL	55mL	110mL
3	封閉血清工作液	3mL	6mL	18mL	55mL	110mL
4	蘇木素染液	3mL	6mL	18mL	55mL	110mL
5	枸櫞酸鈉抗原修復液(20×)	10mL	20mL	60mL	200mL	400mL
6	顯色劑 (1×)	3mL	6mL	18mL	55mL	110mL
7	DAB顯色液 (50×)	60μL	120μL	360μL	1.1mL	2.2mL

[適用范圍]

本產(chǎn)品僅用于免疫組化實驗，適用于手工和機器大批量操作。本試劑僅對10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋的組織進行了驗證，不作其他用途。

[儲存及有效期]

2～8℃避光保存，不得凍存；產(chǎn)品有效期為6個月。

[實驗操作]
1、完成IHC實驗還要的設備和試劑
   a)、移液器、恒溫箱、修復儀、免疫組化筆、計時器、孵育盒、染色架、蓋玻片、光學顯微鏡、洗瓶。
   b)、DAB顯色液工作液：利用顯色劑稀釋DAB顯色液到工作液濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。
   c)、枸櫞酸鈉抗原修復液工作液（pH 6.0，0.01M）：利用雙蒸水稀釋枸櫞酸鈉抗原修復液（20×）到工作液濃度使用。
2、實驗步驟
（1）烘片：鉛筆標記用于區(qū)分石蠟切片，65℃，1-2小時。
（2）脫蠟至水：烘片結束，石蠟切片依次于二甲苯I 30分鐘，二甲苯II 30分鐘，100%、100%、95%、80%、70%的乙醇中各10分鐘，再放入純水里10分鐘。
（3）抗原修復。
  微波法：取一定量枸櫞酸鈉抗原修復液工作液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫  塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，微波低火處理3分鐘，放置8分鐘后低火3分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從  緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗3分鐘×3次。
（4）阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。加入適量的內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑工作液，室溫孵育10分鐘；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。
（5）非特異性位點的封閉：甩去殘夜，滴加封閉血清工作液覆蓋切片，約100-200μL/片，室溫孵育20分鐘。
（6）根據(jù)組織大小，滴加100-200μL或適量的一抗（來自兔/小鼠），37℃孵育60分鐘；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。
（7）滴加100-200μL或適量的HRP標記抗兔/小鼠IgG聚合物，37℃孵育30分鐘；PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。
（8）顯色。加入適量新鮮配制的DAB顯色液工作液，室溫孵育30秒-10分鐘，根據(jù)顯微鏡下著色情況終止反應。
（9）復染。自來水沖洗，蘇木素染液孵育0.5-2分鐘；滴加1%鹽酸酒精分色3秒、PBS浸泡返藍。
（10）脫水、透明、封片。
（11）顯微鏡觀察，拍照。

[注意事項]
1、在每一次染色過程中，必須有空白對照和陰性對照實驗同時進行。
2、如果陽性組織對照不能顯示適當?shù)年栃匀旧?，應判定該批次樣本的檢測結果無效。
3、若HRP標記IgG聚合物孵育溫度過高或孵育時間過長，可能導致染色過強及背景染色。
4、紅細胞和細胞色素 C可能會造成假陽性結果。
5、脫蠟不徹底，容易影響染色效果，建議免疫組化切片脫蠟與常規(guī)HE脫蠟分開。
6、為防止可能出現(xiàn)的假陽性、假陰性結果，在實驗過程中需設置陽性與陰性對照。
7、實驗中滴加試劑時，過多的PBS緩沖液會導致試劑被稀釋，將引起染色強度變?nèi)?，因此，滴加試劑前應除去多余的緩沖液。
8、在實驗操作過程中，請穿戴好手套、眼鏡和實驗服，以及依照相應的實驗流程，做好防護措施。